荧光定量数据分析-荧光定量数据分析(2-ΔΔCt法)

nihdff 2025-02-21 数据分析 12 views

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大家好,今天小编关注一个比较有意思的话题,就是关于荧光定量数据分析问题,于是小编就整理了3个相关介绍荧光定量数据分析的解答,让我们一起看看吧。

荧光定量数据分析-荧光定量数据分析(2-ΔΔCt法)
(图片来源网络,侵删)
  1. 用2-△△CT法处理荧光定量PCR数据时,SD值应该怎么算?
  2. 数字PCR和荧光定量PCR的区别?
  3. PCR和实时荧光定量PCR这两种有什么区别?

用2-△△CT法处理荧光定量PCR数据时,SD值应该怎么算?

因为基本每个样本都是三个复孔,所以用目的基因CT平均减去内参的平均,再算其2-△△CT,EXCEL即可。柱状图的errorbar是你作图的时候,软件自动给出,因为你每组会重复三次

数字PCR和荧光定量PCR的区别?

数字pcr和荧光pcr哪个更准确在定量PCR时,我们常常纠结一个问题,究竟是相对定量还是绝对定量呢?如今,你无需纠结了,因为数字PCR(digitalPCR)来了。尽管这两种技术有些类似,都是估计起始样品中的核酸量,但它们有一个重要的区别。

定量PCR是依靠标准曲线或参照基因来测定核酸量,而数字PCR则让你能够直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的绝对定量。

因此特别适用于依靠Ct值不能很好分辨的应用领域:拷贝数变异、突变检测、基因相对表达研究(如等位基因不平衡表达)、二代测序结果验证、miRNA表达分析、单细胞基因表达分析等。

PCR和实时荧光定量PCR这两种有什么区别?

实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法

PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。

恒温PCR和实时荧光定量PCR的不同,是不同在实时荧光定量PCR的系统中加入了荧光染料(SYBR Green 或Taqman 探针等等)。以SYBR Green为例,这种染料可以结合在双链的DNA上,当PCR不断进行时,每一次退火生成的双链DNA也在增加,荧光染料结合也越多,荧光也越强。在机器中有一个探测荧光的探头,可以定量检测荧光的强度,转换成数值。这样就可以实时记录反映体系中DNA的反应情况

荧光PCR更有优势,因为荧光PCR灵敏度高于恒温PCR,同样价格也高一些

到此,以上就是小编对于荧光定量数据分析的问题就介绍到这了,希望介绍关于荧光定量数据分析的3点解答对大家有用。

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